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        NDV的常规分离与鉴定新城疫
        点击次数:889 发布时间:2012-12-04
         

        病毒分离是诊断NDzui为确切的一种方法,并且可以为感染的毒株定性。通常采用鸡胚接种的方法分离NDV,也可用鸭胚、鹌鹑胚或鸡胚成纤维细胞等。病毒分离时zui好取患病鸡的脑、脾、肺等组织的匀浆混合物,加抗生素处理后,接种于鸡胚或其他禽类胚的尿囊腔或鸡胚成纤维细胞中。组织样品须反复冻融3次以上,以确保病毒分离的成功。病料接种鸡胚后,一般培养36~96h鸡胚发生死亡,可见胚体的头、翅、颈、胸等处出血,尿囊液清朗,内含大量病毒,呈现较高的血凝性。分离病毒时还应结合相应的血凝和血凝抑制试验等方法进行检测,以便使结果更加可靠。病毒分离后需要进一步测其鸡胚平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(1CPl)、静脉致病指数(1VPD等一系列生物学指标。

        该方法用于诊断ND,准确、可靠,但整个过程较为繁杂,耗时较长,因此,很难在基层兽医工作中得到广泛应用。

        (1)样品采集 活禽用气管拭子和泄殖腔拭子(或粪便);死禽以脑为主;也可采心、肝、脾、肾、气囊等组织。

        (2)样品处理 样品用生理盐水或磷酸盐缓冲液(PBS)研成1;5乳液;拭子浸入2—3ml生理盐水或PBS缓冲液中,反复吸挤压至无水滴出,弃之。溶液中加入青霉素(使终浓度为1000单位/mi)链霉素(使终浓度为lmg/mi)泄殖腔拭子(或粪)样品,青霉素、链霉素量提高5倍。然后调pH 7.0~7.4,37~C作用1h,再1000r/rain离心10min,取上清0.1ml备用。

        (3)病毒分离和鉴定 将病料接种9~lo日龄SPF鸡胚,经孵化后,检查尿囊液是否具有血凝性(HA)以及这种血凝性能否被新城疫特异抗血清所抑制(H1)。若有血凝性(HA效价>24)且血凝性能被特异血清所抑制,则证明分离到了新城疫病毒,但该病毒并不一定是致病的强毒,也有可能是疫苗毒÷因此必须对分离到的病毒进行致病力测定。
        http://www.bpdt.tw/

         
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