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        酶活性分析法检定蛋白质
        点击次数:486 发布时间:2013-01-16
         

        方法步骤:
        1) 吸取20 μL 的蛋白质样本,小心注入微量滴定盘中,避免气泡产生。
        2) 每一样品槽加入200 μL 基质液,混合均匀;可用烧热的接种环去除气泡。
        3) 静置约1~2 min,颜色开始加深,然后加入30 μL 终止液。 反应时间的长短,要以样本中的酶活性大小來做调整。因为我们只测定色析法各分划的相对酶活性,因此并不加终止液。
        4) 以ELISA 光度计测定波长415 nm 的吸光值。

        酶活性单位的测定:
        a. 以上步骤,只可测定GUS 活性的相对大小,对色析法所得到的各个分划进行侦测,相当方便,但并非酶活性单位的测定方法。
        b. 若要测定酶的活性单位,要使用zui适当的酶用量,使酶在反应一段固定的时间后,其生成物的呈色吸光度,落在光度计的可测范围的内;然后计算此段时间内,每分钟所产生的吸光度增加量,转换成生成物的莫耳数,即可求得其真正的活性单位。
        c. 因此酶的活性单位定义为:每分钟所能催化生成物的 μmole 数。

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